Zwf mutant synechocystis sp. pcc6803 suşunun karakterizasyonu üzerine araştırmalar / Mehmet Taha Ay; Danışman Haydar Karakaya

Abstract

Bu araştırmada zwf geni silinmiş (Azwf) bir Synechocystis sp. PCC6803 suşunun karakterizasyonu çalışmaları yürütülmüştür. Böyle bir Azwf mutanta, sistein kodonlarının değiştirildiği nokta mutasyonları içeren genlerin fenotipik analizi için ihtiyaç duyulmaktadır.Daha önce Synechocystis sp. PCC6803 zwf gen bölgesi 3.7 kb bir fragment olarak klonlanmış genin büyük kısmı silinerek yerine omega fragmenti bağlanmış ve yabani tip hücrelere transforme edilmişti. Bu çalışmada, transformat hücrelerde yabani tip kromozomların segregasyonu ile araştırmalara başlanmıştır. Segregasyonun gerçekleştiği, transformant hücrelerden izole edilen kromozomal DNA'nın zwf bölgesinin PCR amlifikasyonu ile belirlendi. Bu hücrelerden beklenen büyüklükte tek bir ürünün elde edilmiş olması segregasyonun gerçekleştiğini göstermiştir.Yabani tip ve mutant hücrelerden elde edilen amplifikasyon ürünlerinin restriksiyon analizleri yapılarak mutasyonun doğru pozisyona transfer edilip edilmediği test edildi. Bu analizlerin sonucunda gözlenen bütün fragment büyüklüklerinin beklenen büyüklüklerle aynı olduğu gözlendi ve transformantlarda zwf geninin silindiğine karar verildi. Elde edilen bu Azwf hücrelere SDZ1 suş ismi verildi.SZD1 hücreleriyle yabani tip hücrelerin gelişmeleri karşılaştırıldığında mutant hücrelerin bir miktar yavaş ürediği gözlendiyse de bu farkın önemli bir düzeyde olmadığı görülmektedir. Mutant hücrelerde G6PDH enzim aktivitesi belirlenmemiştir. Bu, genotipik beklentiye uygun bir gözlemdir.Bütün bu çalışmaların sonucu olarak burada Azwf bir Synechocystis sp. PCC6803 suşunun karakterizasyonu yapılmış olup bu mutant G6PDH enzimi üzerine yapılacak moleküler biyolojik araştırmalarda kullanıma hazırdır.